判断感受态细胞制备的优劣主要是通过转化效率来检测。经转化外源质粒DNA的大肠杆菌在含抗性的LB平板过夜培养后,平板上长满克隆且阴性对照(未转入外源DNA的感受态)没有克隆,证明感受态细胞制备良好。
对照的目的是对检测的各个环节进行监控,因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。常规荧光定量PCR的流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。
支原体(Mycoplasma)是一种大小介于细菌和病毒之间(0.1 - 0.6μm),没有细胞壁、并独立生活原核生物,形态呈高度多形性,呈圆形、丝状或梨形。由于支原体直径较小,进行除菌过滤是,约1%的支原体可以直接穿过常规的0.22μm的微孔除菌滤膜,造成细胞的支原体污染。
常见的 DNA 聚合酶如 Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29 等等。根据耐热性来分可分为耐热酶和常温酶。耐热聚合酶如 Taq、Pfu、KOD、Primerstar 等,常温聚合酶包括 Klenow、Bst、Phi29 等。根据保真度来分,高保真聚合酶 Pfu、KOD、Phanta 等,普通聚合酶 Taq 等。
细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。